|
|
شنبه ۱۸ شهريور ۱۳۹۱ ساعت ۰۸:۴۹
کد مطلب : 6678
كلونينگ ژن F ويروس بيماري نيوكاسل در باكتري Escherichia.coli
|
فرج الله شهرياري، محمد رضا باسامي، سيد حسن مرعشي، سيد عليرضا موسوي
بيماري ويروسي نيوكاسل از مهمترين بيماري هاي طيور مي باشد كه ساليانه خسارات زياد ي ايجاد مي نمايد . با توسعه مهند سي ژنتيك، امروزه از گياهان براي توليد واكسنهاي انساني و د امي استفاد ه مي شود . ژنهاي فيوژن (F) و هماگلوتنين نورآمينيد از(HN) ژن هائي اين ويروس هستند كه د ر عفونت زايي و بيماريزايي اهميت د ارند . د ر اولين اقد ام براي كلونينگ اين ژن د ر باكتري E.coli، ژن F از طريق استخراج RNA از سويه B1 اين ويروس جد اسازي، و cDNA آن ساخته شد و سپس توسط واكنش PCR تكثير گرد يد . جهت تائيد اختصاصي بود ن محصول PCR، از هضم آنزيمي توسط آنزيم هاي EcoRI و SacI استفاد ه شد . ژن F و ناقل pUC18 توسط آنزيم هاي برشي XbaI و BamHI مورد هضم مضاعف قرار گرفتند . محصولات هضم مضاعف توسط آنزيم DNA Ligase وT4 به هم متصل گرد يد ند و ناقل نوتركيب د ر باكتري E.coli ترانسفورم گرد يد . از پرگنه هاي سفيد كه نشان د هند ه نوتركيب بود ن باكتري حامل آنها بود استخراج پلاسميد انجام گرفت و توسط هضم با آنزيم هاي برشي EcoRI و SacI و XbaI و BamHI وجود ژن د ر د اخل پلاسميد تأئيد گرد يد . تكوين كلون باكتري حامل اين ژن منبعي پايد ار جهت د سترسي به كلون فيوژن جهت بيان ژن د ر سيستم هاي مختلف از جمله انتقال به گياه مي باشد .
کليدواژگان: ويروس بيماري نيوكاسل (NDV)، كلونينگ و ژن فيوژن (Fusion)
